2025年7月14日 星期一

會與固定相基質上交聯之特殊配位基作專一性結合之蛋白質分子會留在管柱上,不會結合的蛋白質則被緩衝液沖提出來。爾後再以含有游離配位基之緩衝液進行沖提,將結合在管柱上之蛋白質沖提出來

 靜脈灌注胺基酸可導致循環㆗兒茶酚氨之含量增加 74-75。精氨酸對於這些荷爾蒙之機轉仍有待澄清。在腦㆘垂體分泌之荷爾蒙之釋放機制包括多巴胺性 ( dopaminergic ),新腎㆖腺性 ( noradrenergic ) 以及血清素激活性 ( serotoninergic ) 之㆔種路徑 76。 最新研究指陳:㆒氧化氮合成酉每存在於胰臟、腎㆖腺以及腦㆘垂體 77。因此,科學家認為㆒氧化氮媒介主要的荷爾蒙釋出反應,尤其使用胺基酸誘發荷爾蒙之機轉,乃是介由㆒氧化氮 76-77 。因此諸多實驗證據指陳:對於胰島素、生長激素、泌乳激素以及兒茶酚氨之分泌,㆒氧化氮的確扮演相當重要的角色 77,78。十㆒、精氨酸副作用< 作用 L-精氨酸是相對㆞無毒性。動物實驗已顯示空腹老鼠致死劑量 ( LD50% ) ㆒半為每公斤 3.8 克 79。事實㆖㆟類使用大劑量來測量腦㆘垂體功能其來有自。㆒般而言,使用每公斤 0.5 公克至 30 公克,靜脈注射 20 分至 30 分鐘皆無明顯之副作用 67,68,尤其是應用於生長激素之測定,最早由美梨米等㆟發表於著名之 Lancet ( 刺胳針 ) 雜誌暨新英格蘭雜誌 80,81。通常精氨酸灌注是相當安全的,但是精氨酸與其他陽離子氨基酸皆可導致鉀離子從細胞內液轉向細胞外液 80,因而產生高血鉀情況 81 。它亦可刺激鉀離子排出 81。對於高血壓使用精氨酸灌注,反而會使鈉離子排出增加,尤其是鹽分敏感病㆟。㆒般而言,正常㆟鉀離子排除相當快速,通常不會造成生理㆖之困擾。然而在特定病㆟諸如肝疾或腎功能不全,由於無法代謝精氨酸或是排鉀能力減弱。因此文獻㆖曾經出現高血鉀之報告 82。靜脈灌注精氨酸 ( 每分鐘< 每公斤 8 毫克 ) 目前用來降低血壓,尤其是高血壓病㆟以及主動脈重健手術時使用,成效良好 83。這些降壓效應,㆒般認為是經由精氨酸轉換為㆒氧化氮所致,特別是內皮細胞,造成血管擴張效果 83。另外副作用值得㆒提的是過敏性反應 (㆖呼吸道阻塞、紅斑疹、手腳水腫 )84。尤其在大量灌注時,這些症狀仍須靠組織胺使用,就無大礙 84。這些現象最早由提瓦利等㆟提出 84。這些現象之機轉,究竟是胺基酸本身所引起或是精胺酸聚合物。或是灌注㆗含〝不純物質〞所導致仍未定論 84。但最新文獻使用精胺酸注射灌注,皆無㆖述副作用報告。由於藥物之純化< 提煉過程日益精進,大體而言,大量靜脈注射精氨酸相當安全。特別是肝、腎功能衰竭病㆟使用應特別小心。 總之使用大量精氨酸對於健康㆟及癌症病㆟作為營養療法 ( 連續 3 ㆝,每㆝高達 30 克 ) 皆可安全㆞使用 85,86。㆒般病㆟耐受性良好,最大之副作用為腹瀉 (可用止瀉劑控制 ),輕度腹瀉及腸胃不適,文獻㆖皆有報告,但比例仍少 85,86。平心而論:精氨酸 ( 食療或補充 )皆有益於身體內皮功能之改善,副作用輕 微。大量使用可明顯降低血壓。 十㆓、精氨酸在健康< 疾病所扮演之角色在 1886 年最早由德國科學家舒茲首先發現精氨酸 2,3。


在中國造成近四萬的嬰幼兒就醫,根據新華網的報導,其中兩歲以內的嬰兒佔了 81.87%。二至三歲的幼兒佔了 17.33%,三歲以上幼兒佔了0.8%毒奶事件評斷奶粉的品質優劣,精氨酸和蛋白質含量有很大的關係,過去常用的檢測法為凱氏定氮法 三聚氰胺 因為三聚氰胺帶有很多的氮,所以在凱氏定氮法中出現檢測盲點,檢測數據含氮量很高,但這個氮丌是來自於蛋白質,而是來自於三聚氰胺 毒奶事件 (圖片摘自華爾街日報中文網路版)

 親和性層析法(affinity chromatography)則利用蛋白質結合親和力之差異加以分離。  管柱中之膠體顆粒上共價聯結了特定化學分子基團 (配位基),會與這些配位基作專一性結合之蛋白質分子留在管柱上,因此延滯了它們通過管柱的速度,藉此達到分離純化的效果(圖3-18c)。  圖3-18(c) 顯示親和性層析法利用蛋白質與固定相 胺基酸基質上連接之特殊配位基間結合專一性能力之差異進行分離。會與固定相基質上交聯之特殊配位基作專一性結合之蛋白質分子會留在管柱上,不會結合的蛋白質則被緩衝液沖提出來。爾後再以含有游離配位基之緩衝液進行沖提,將結合在管柱上之蛋白質沖提出來,藉此達到純化的效果。 圖3-18(c) 蛋白質純化常用的三種管柱層析方法  最新改良的層析法是高效能液相層析法(high performance liquid chromatography;HPLC)。此方法利用高壓幫浦,搭配填充可抵抗高壓流動下造成 之碎裂力之高品質層析介質,以提高蛋白質分子在管柱中移動的速度。藉由層析時間的減少,HPLC 可有效限制蛋白質色帶的擴散分散現象,因而大幅提升解析度。  隨著每個純化步驟的完成,胺基酸蛋白質樣品含量與體積通常會隨之減少(表3-5),此時較適合以更複雜(且較昂貴)的管柱層析法加以分離。

當要求較高之相同性時,最具保守性之胺基酸殘基往往會被過分呈現,而使得這些基質在用來辨識相關性較低之同源蛋白質時較不適用。  測試結果顯示 Blosum62 胺基酸可提供範圍最大的蛋白質家族之可靠比對,因此它也成為許多序列比對軟體之系統原始設定表格。  圖3-31 顯示此區塊取代基質表是經由比較數以千計之序列比對小區塊所產生,這些小區塊之序列至少有 62% 完全相同。其餘不相同的殘基則被賦予一分數,說明它們被其他胺基酸殘基取代之頻率。  每次取代都對一次特定之比對分數有貢獻,正值(黃色標示者)會增加分數,胺基酸負值則會減去分數。比對序列中相同的殘基(自左上至右下角對角線黃色標示者)也因它們被取代的頻率產生一個分數。  具有特殊化學性質之 Cys 與 Trp 分別得到9與11分的高分,而較易在保守性取代中被替換之 Asp 與 Glu 則各有6與5分。  許多電腦程式利用 Blosum62 為新的序列比對打分數。

 (a)已知分子量之蛋白質標準品經電泳分離如第一行所示,這些樣品蛋白質可用來估算未知蛋白質之分子量(第二行)。  (b)以分子量之對數值對相對電泳泳動率作圖可得到一線性關係,如此即可在圖中讀取未知蛋白質之分子量。 圖 3-20 估算待測蛋白質之分子量。 胺基酸等電焦集法(isoelectric focusing,IF)是一種用以計算蛋白質等電點(pI)的電泳方法(圖3- 21)。  利用小分子量有機酸鹼之混合物在電場中分布至膠體之特定區域以建立一個 pH 值梯度。當置入蛋白質混合物進行電泳分析時,每一種蛋白質均會泳動到恰等於本身等電點之 pH 值所在(表3- 6)。  不同等電點之蛋白質就可以在這種膠體中分離開來。

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